Ponieważ leki peptydowe białkowe są w większości substancjami bioaktywnymi

Ponieważ leki peptydowe białkowe to w większości substancje bioaktywne, a aktywność biologiczna zależy nie tylko od pierwszorzędowej struktury leku, ale także jest ściśle związana ze strukturami drugorzędowymi i trzeciorzędowymi, próba biologiczna jest unikalną i niezbędną metodą badania farmakokinetyki tej klasy. Testy biologiczne mają dwa cele: bezpośrednie określenie stężenia leku w płynach ustrojowych i identyfikację aktywności biologicznej znakowanych leków. Jej metody można podzielić na dwie główne kategorie.
1.1.1 Analiza in vivo Konwencjonalna metoda pomiaru glukozy we krwi myszy z insuliną itp., oprócz różnych metod ustalonych na podstawie aktywności biologicznej różnych typów polipeptydów białkowych, takich jak neutrofile mobilizujące IL-8 w doświadczeniach na królikach ustalonych zgodnie zgodnie z naturą IL-8 może mobilizować dużą liczbę neutrofili z kości [1]. Metoda tego typu w najbardziej intuicyjny sposób odzwierciedla aktywność biologiczną, jednak angażuje całe zwierzę, jest czasochłonna i pracochłonna, charakteryzuje się niską czułością oraz dużą zmiennością.
1.1.2 Analiza tkanki (komórki) in vivo, taka jak NGF, stymuluje wzrost zwojów korzeni grzbietowych kurcząt, oksytocyna w metodzie macicy szczura ex vivo itp. Wraz z rozwojem biologii molekularnej ustalono wiele specyficznych i wrażliwych zależnych linii komórkowych, a hodowla komórkowa stała się najpowszechniejszą metodą. Zgodnie z różnymi mechanizmami interakcji peptydów białkowych z komórkami istnieje wiele specyficznych operacji. Takie jak testy proliferacji, które są szybkie i czułe, ale nieco mniej specyficzne; System wykrywania antyproliferacji jest prosty, czuły i specyficzny; Testy redukcji efektu cytopatycznego [2], oparte na lekach o działaniu przeciwwirusowym, takich jak interferon, chronią komórki przed uszkodzeniem wirusowym, metoda jest intuicyjna i czuła, ale mogą zakłócać ją podtypy peptydów. Powyższe metody opierają się na zwiększaniu i zmniejszaniu liczby komórek jako ilościowych i skutecznych wskaźnikach, a metody liczenia obejmują metodę liczenia bezpośredniego i metodę liczenia pośredniego, ta ostatnia obejmuje metodę MTT, metodę inkorporacji izotopów (3H, 14C) itp. Ponadto istnieją badania oparte na pośredniej interakcji polipeptydów białka jaja kurzego z komórkami, takie jak metoda indukcji przeciwciał połączona z immunodetekcją [3], metoda rozkładu indukowanego enzymami w połączeniu z reakcją enzymatyczną [4] i tak dalej. Ogólnie rzecz biorąc, metody hodowli komórkowych mają zalety w postaci czułości i swoistości, obiektywności i niezawodności, ale ich wady są również oczywiste. Po pierwsze, za pomocą testów biologicznych nie można określić ilościowo nieaktywnych małych metabolitów ani prześledzić ich dynamiki in vivo; Po drugie, próbki występują najczęściej w surowicy ludzkiej lub zwierzęcej, a interferencja substancji endogennych w surowicy i reakcja krzyżowa ewentualnych czynników endogennych wpływają na specyfikę metody. Ponadto do zainicjowania procesów biologicznych często wymagane są cytokiny progowe, co zmniejsza czułość metody; Długotrwała hodowla komórek szczepów zależnych jest podatna na mutacje wpływające na specyficzność testu.